功能性饲料添加剂，促进肠道完整性并防止肠道粘孢子虫内寄生虫 Enteromyxum leei

Panos G. Kalatzis, Maria Mercè Isern-Subich, Waldo G. Nuez-Ortín,安迪苏

肠道对鱼类健康和性能的重要性

健康的消化道是所有养殖鱼类获得最佳生长和性能的基本要素。

除了营养吸收和消化这些主要功能外，肠道在维持鱼类健康方面也发挥着重要作用（Kristen等人，2012；Tarnecki等人，2017）。然而，有几种非感染性和感染性因素可能会导致肠道主要组成部分（微生物群、上皮细胞和上皮内白细胞）之间的失衡。在过去几年中，有关肠道微生物群的科学研究数量呈指数级增长（Egerton 等人，2018 年；Bozzi 等人，2021 年），然而，肠道微生物群的复杂性以及可能带来更好鱼类健康和性能的潜在干预措施仅仅触及表面（Montalban 等人，2015 年）。这种肠道失衡的临床表现称为肠炎，是由巨噬细胞等上皮内免疫细胞激活引发的全身性肠道炎症。

图 1. (A) 添加和未添加 SANACORE GM® （0.5%）时前肠的跨膜阻力。100 克健康鲷鱼幼鱼肠道的组织阻力预计大于 150 Ω cm2，因此用虚线设定了阈值。(B) 在补充 SANACORE GM® （0.5%）的情况下，组织抗性高出 30%，差异具有统计学意义。统计显著性用 * 表示。

肠道的炎症反应是机体因感染或受伤而产生的防御机制。虽然它在短期内是有益的，但如果持续时间过长，就会导致慢性炎症，从而破坏肠道的营养吸收和免疫功能。营养因素（如饲料中使用植物成分）和肠道病原体（如肌孢子虫寄生虫 Enteromyxum leei）的结合会进一步严重破坏肠道完整性，影响鱼类的生长和性能（Sitjà-Bobadilla 等人，2019 年；Piazzon 等人，2022 年）。还应注意的是，良好的肠道功能是避免鱼类亚临床症状的先决条件，亚临床症状可能不会立即显示出直接后果，但一旦环境中出现任何突然或急剧变化，如温度不达标、高密度放养、机会性病原体、疫苗接种或转运压力等，就会立即显示出直接后果。因此，能够促进和保护肠道健康的功能性饲料添加剂如今可能会在配方中占据重要地位。

图 2.(A) 内部：外部周长比。左侧切片（SANACORE GM®）的比率比右侧（对照组）高出 7%，肠道完整发达，有许多形状良好的绒毛。(B）外径：内径比。左侧切片（SANACORE GM®）的外径与内径比比右侧切片（对照组）高出 11%，这是因为绒毛的发育更加一致，导致管腔空间变小。

本文旨在评估和介绍商业名称为 SANACORE GM® 的功能性饲料添加剂对宿主肠道的影响。有据可查的对肠道完整性、绒毛形成、抗炎症反应以及由此产生的对霉形体寄生虫 E. leei 的保护活性的有益影响，描绘了一个更健康的肠道，它不仅能产生更好的性能指标，还能使病原体更难渗入和破坏组织。

SANACORE GM® 可促进肠道完整性并防止 E. leei 感染

安迪苏的 SANACORE GM® 是一种广谱、促进健康的添加剂，其成分具有肠道完整性和抗炎作用。SANACORE GM® 对肠道完整性和促进健康的积极影响已在文献和欧盟水产养殖项目（如 ParaFishControl）中得到广泛记载。

肠道消化和健康功能的发挥需要肠道完整性的完好。在金头鲷（Sparus aurata）中测量了肠道的跨上皮电阻（TER），作为肠道完整性的指标。与对照组相比，在添加补充剂的情况下，TER 明显增加了 30%（图 1）。细胞间的连接越紧密，电流就越难通过，因此，肠道完整性的切实改善有助于更好地吸收营养、提高生长性能和增强鱼类健康。

对鲷鱼肠道的形态计量学研究，通过关注肠绒毛的长度和表面，证实了之前的结果。后肠是对肠道炎症最敏感的部位，其绒毛显示，在补充 SANACORE GM® 后，内：外肠周长和外：内肠直径分数分别增加了 7% 和 11%（图 2）。生物

图 3.细胞混合刺激后的炎症恢复能力。酶联免疫吸附试验结果表明，在所有 4 种不同浓度（0.1x、0.2x、0.4x 和 1x）和两个时间点（2 小时和 16 小时）中，SANACORE GM® 是将炎症状态维持在阈值以下的最有效添加剂。

这些数字的意义在于：绒毛发育更一致、绒毛发炎更少、管腔空间更大、粘膜表面更大，从而改善肠道完整性。

炎症过程是由包括白细胞介素（IL）在内的促炎细胞因子分泌介导的。作为炎症级联的生物标记物，IL-8 作为中性粒细胞白细胞趋化吸引剂或激活剂在研究中得到了特别的研究和广泛的应用（Kim 等人，2019 年；Laing 等人，2002 年；Laing 等人，2004 年）。为了评估对 SANACORE GM® 和其他两种商业饲料添加剂的炎症反应，我们使用了源自模拟功能性肠道屏障的上皮细胞的 caco-2 细胞系（van de Walle 等人，2010 年）作为体外模型。细胞暴露于促炎细胞因子混合物（cytomix）中，结果表明，添加 SANACORE GM® 能最有效地将 IL-8 水平维持在 90% 的抗炎效果阈值以下，而其他测试添加剂在大多数浓度和时间点上要么没有效果（90-110%），要么产生促炎效果（>110%）（图 3）。

SANACORE GM® 作为一种预防病原体侵袭的策略，其成功应用直接体现了对肠道完整性和肠道健康的支持。E.leei是一种肌孢子内寄生虫，在肠道中定植，偶尔也会在胆汁中发现。金头鲷的肠肌炎是一种慢性病，而不是急性病，因为它不会立即导致死亡，而是会逐渐引起厌食、体重减轻、肌肉减少，最终导致死亡。然而，当发生在更敏感的鱼类身上时，例如尖吻鲷（Diplodus puntazzo）和红鲷（Pagrus major），死亡的速度会更快（Palenzuela 等人，2020 年；Henry 等人，2020 年）。寄生虫的感染途径是通过上皮细胞之间已经松散的连接，进一步加剧了肠炎的临床表现。肠道完整性的破坏损害了宿主的健康，同时也使其容易受到二次感染。在地中海水产养殖中，尤其是金头鲷和尖吻鲷的养殖中，雷氏鳗就是一个典型的例子（Palenzuela 等人，2020 年；Henry 等人，2020 年）。在前一种情况下，SANACORE GM® 与未经处理的感染对照组相比，可减轻感染导致的 SGR 下降达 15%。功能性饲料还可将感染率降低 30%，而与未处理的对照组相比，每条鱼的平均寄生虫数量明显减少（Palenzuela 等人，2020 年）。
可持续水产养殖的努力和海洋来源原料的高价格促使该行业不断增加植物性成分，并鼓励开发水产养殖日粮中的替代营养源。最近的一项研究证明，在零鱼粉（FM）日粮中添加 SANACORE GM® 以帮助鱼类应对 E. leei 感染的效果与添加 20% FM 以避免肠道对寄生虫易感性增加的效果相同（Piazzon 等人，2022 年）。